傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

UO-31人腎癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Phospho-FOXO1 + FOXO3 + FOXO4 (phospho T24 + T32)： 0酸化叉頭蛋白家族抗體 T Others Human 人 ansthyretin / T / Prealbumin / PALB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Hep G2, 人肝癌細(xì)胞系 兔子白介素1可溶性受體I (IL-1sR Ⅰ)ELISA 試劑盒 IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml

Phospho-FoxO3a (Ser318 + Ser321)： 0酸化叉頭蛋白3A抗體 細(xì)胞名稱 種屬

HHpC-c 人肝細(xì)胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC 兔子白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒 IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml

Phospho-FoxO3a (Ser294)： 0酸化叉頭蛋白3A抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1

CL-0353hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠氧化酶(COX)ELISA試劑盒 E2 雌二醇 96T

MCT2： 單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A2

NCI-H446(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 COLO 205(結(jié)腸癌細(xì)胞) 大鼠(Cyt-C)ELISA試劑盒 ET3 游離狀腺原酸T3 96T

MDH1： 可溶性蘋果酸脫氫酶抗體 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞;IEC-6

IL1B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-1 beta / IL1B 蛋白 大鼠(Cyt-C)ELISA 試劑盒 ALDH  大鼠乙醛脫氫酶 96T

UO-31人腎癌細(xì)胞HPV18 E6 protein： 人類狀瘤病毒18 E6單克隆抗體 CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

GNM細(xì)胞，上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌 宋氏志賀氏菌 人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WML6.0 人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA 試劑盒 HMGA2 (high mobility group A2) 高遷移率族蛋白A2抗原 0.5mg

hnRNP F： 異質(zhì)核糖核蛋白F抗體 CD36 Others Mouse 小鼠 CD36 / GP3B / SCARB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠骨髓瘤細(xì)胞;IR983F 人單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 試劑盒 HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原 0.5mg

hnRNP K： 異質(zhì)核糖核蛋白K抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0909