傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

PL45人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

HMEpC Pellet 人類上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人髓核細(xì)胞cDNAHNPC cDNA 人雄(ASD)ELISA 試劑盒 Rabbit Anti-dog IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml

GALR2： 甘丙肽受體2抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF

EB (NBL-4) (牛胚氣管細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)ELISA 試劑盒 Rabbit Anti-dog IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml

GALR3： 甘丙肽受體3抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

肌細(xì)胞分離液MDS (TP-5)ELISA 試劑盒 Rabbit Anti-dog IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml

T24-EGFP(CMV-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人膀胱癌細(xì)胞 T24-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) of human bladder cancer cells 1640+10% FBS 大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA 試劑盒 LHRH  大鼠黃體生成素釋放激素 96T

phospho-NDEL1(Thr219)： 0酸化中心粒蛋白Nudel抗體 RTN4R Others Human 人 RTN4R / NOGOR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CM-R052大鼠子宮平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 大鼠熱休克蛋白β8(HSPβ8)ELISA試劑盒 OSMR(human oncostatin M receptor)  人制瘤素M受體 96T

NDUFS4： 線粒體復(fù)合物NDUFS4蛋白抗體 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-2H3

人腦血管平滑肌細(xì)胞 (HBVSMC)( 5×105 ) 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 MCF-7(MCF7)(ATCC來(lái)源), 人癌細(xì)胞 大鼠熱休克蛋白β6(HSPβ6)ELISA試劑盒 vWF(Mouse von Willebrand Factor)  小鼠血管性血友病因子/瑞斯托輔因子 96T

PL45人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞phospho-IKK beta(Ser471)： 0酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 人成骨肉瘤細(xì)胞;MG-63

T84(人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞);YAC-1 人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA 試劑盒 CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原) 0.5mg

phospho-IKK beta(Ser740)： 0酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 海馬神經(jīng)應(yīng)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

CSF1 Protein Mouse 重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA 試劑盒 CD133 造血干細(xì)胞抗原(多肽抗原) 0.5mg

phospho-IKK beta(Ser733)： 0酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 PTPN12 Others Human 人 PTPN12 (aa 1-355) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)