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    微生物生長(zhǎng)的測(cè)定

    點(diǎn)擊次數(shù):1415  更新時(shí)間:2016-01-22

        微生物生長(zhǎng)是細(xì)胞物質(zhì)有規(guī)律地.不可逆增加,導(dǎo)致細(xì)胞體積擴(kuò)大的生物學(xué)過(guò)程,這是個(gè)體生長(zhǎng)的定義。繁殖是微生物生長(zhǎng)到一定階段,由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與重建并通過(guò)特定方式產(chǎn)生新的生命個(gè)體,即引起生命個(gè)體數(shù)量增加的生物學(xué)過(guò)程。微生物的個(gè)體生長(zhǎng)特點(diǎn)是時(shí)間裉短,很快就進(jìn)入繁殖階段,生長(zhǎng)與繁殖難以分開。因此,常常以群體生長(zhǎng)作為細(xì)菌生長(zhǎng)的指標(biāo),除有特定的目的以外.在微生物的研究和應(yīng)用中,只有群體的生長(zhǎng)才有意義,而群體生長(zhǎng)常常表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目或物質(zhì)的增加。對(duì)細(xì)胞物質(zhì)的增加可以用生物量來(lái)表示。對(duì)于單細(xì)胞微生物生長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定時(shí),既可取緬胞數(shù),也可選取細(xì)胞重量作為生長(zhǎng)的指標(biāo);而對(duì)于多細(xì)胞,特別是絲狀真菌,則以菌絲生長(zhǎng)的長(zhǎng)度或菌絲的重量為生長(zhǎng)指標(biāo)。微生物生長(zhǎng)的測(cè)定主要有計(jì)繁殖數(shù)和測(cè)生長(zhǎng)量等方法。

    (1)計(jì)繁殖數(shù)

    ①顯微直接測(cè)數(shù)法適用于單細(xì)胞的微生物類群。測(cè)定時(shí)用細(xì)菌計(jì)數(shù)器或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(適用于酵母、真菌孢子等)在光學(xué)顯微鏡下直接觀察細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)。此法十分常用,但得到的數(shù)目是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)??捎锰厥馊玖蠈?duì)活菌染色再進(jìn)行顯微計(jì)數(shù),如細(xì)菌經(jīng)吖啶橙染色后,在紫外線顯微鏡下可觀察到細(xì)胞發(fā)出橙色熒光,而死細(xì)胞則發(fā)出綠色熒光,因此可用以區(qū)別活菌和死菌。

    ②平板菌落計(jì)數(shù)法 迄今zui廣泛采用的主要活菌計(jì)數(shù)方法,適用于各種好氧菌和厭氧菌,具體分為平板涂布法和傾注法。其主要操作是把稀釋后的一定量菌液通過(guò)澆注或涂布的方法,讓其內(nèi)的微生物單細(xì)胞一一分散在瓊脂平板上(內(nèi)),待培養(yǎng)后,每一活細(xì)胞就形成一個(gè)單菌落,即“菌落形成單位”(colony forming unit,cfu),根據(jù)皿上形成的cfu數(shù)去推算菌樣的含菌數(shù)。此法所得到的數(shù)值往往比直接法測(cè)定的數(shù)字小。另外,操作較繁瑣且要求操作者技術(shù)熟練,在混合微生物樣品中只能測(cè)定占優(yōu)勢(shì)并能在供試培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的類群。

    (2)測(cè)生長(zhǎng)量

    ①干重法直接測(cè)定生長(zhǎng)量的較常用方法。收集單位體積培養(yǎng)液中菌體,以清水洗凈,然后在100℃左右烘干細(xì)胞或減壓干燥,稱重。由于重可知鮮重:細(xì)菌干重為鮮重的20%~25%,酵母干重為鮮重的15%~30%,絲狀真菌干重為鮮重的10%~15%。

    ②比濁法可使用光電比色計(jì)測(cè)定,通過(guò)測(cè)定菌懸液的光密度或透光率反映細(xì)胞的濃度.是測(cè)定懸液中細(xì)胞數(shù)的快速方法,一般選用450~650nm波段。因細(xì)胞濃度僅在一定范圍內(nèi)與光密度呈直線關(guān)系,因此待測(cè)菌懸液的細(xì)胞濃度不應(yīng)過(guò)低或過(guò)高.培養(yǎng)液的色調(diào)也不宜過(guò)深,顆粒性雜質(zhì)的數(shù)量應(yīng)盡量減少。要連續(xù)跟蹤某一培養(yǎng)物的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài),可用帶有側(cè)臂的三角燒瓶做原位測(cè)定。

    ③生理指標(biāo)法 以代謝作用所消耗或產(chǎn)生的物質(zhì)的量表示微生物的生長(zhǎng)量。如微生物對(duì)O2的吸收、產(chǎn)生CO2的量、發(fā)酵糖產(chǎn)酸量、測(cè)含氮量、測(cè)含碳量以及測(cè)磷、DNA、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)等,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件適當(dāng)選用,其應(yīng)用的前提是作為生長(zhǎng)指標(biāo)的那些生理活動(dòng)不受生長(zhǎng)以外的其他因素影響。

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