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    青海發(fā)光桿菌菌種保藏方法操作步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):1166  更新時(shí)間:2016-12-29

    青海發(fā)光桿菌菌種保藏方法操作步驟

    1 培養(yǎng)基制備

    1.1 器皿準(zhǔn)備 培養(yǎng)基制備過(guò)程中所用的一些玻璃器皿,如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、燒杯、吸管等,經(jīng)洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。

    1.2 溶解培養(yǎng)基配料 先在燒杯中放適量水,按培養(yǎng)基配方稱取各項(xiàng)材料,依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解,zui后加足水量,攪拌均勻。

    1.3 調(diào)pH值 配料溶解后將培養(yǎng)基冷卻至室溫,根據(jù)要求加稀酸(0.1mol/L鹽酸)或稀堿調(diào)pH值。加酸或堿液時(shí)要緩慢、少量、多次攪拌,防止局部過(guò)堿或過(guò)酸而導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)確和營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。

    1.4 加凝固劑 配制固體培養(yǎng)基時(shí)需加凝固劑,如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養(yǎng)基中,加熱并不斷攪拌至融解,再補(bǔ)足所蒸發(fā)水分。

    1.5 過(guò)濾分裝 在二層紗布中間夾入脫脂棉,將配好的培養(yǎng)基趁熱過(guò)濾并分裝。斜面培養(yǎng)基分裝量約為試管高度的四分之一(4~5mL),穿刺培養(yǎng)基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過(guò)程中勿使培養(yǎng)基沾污管口,以免弄濕棉塞造成污染。

    1.6 包扎標(biāo)記 將試管加棉塞,外面包扎一層牛皮紙或鋁箔并注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。

    1.7 滅菌 根據(jù)要求將培養(yǎng)基滅菌,通常蒸汽滅菌為121℃,15~20min。

    1.8 斜面擺放 滅菌后及時(shí)擺放斜面,斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管管長(zhǎng)的二分之一為宜。

    1.9 無(wú)菌檢查 將滅菌的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作無(wú)菌檢驗(yàn),通常30℃培養(yǎng)1~3天。無(wú)菌檢查合格后將其保存于4℃下備用。

    2接種

    2.1 斜面接種

    2.1.1 點(diǎn)接

    把菌種點(diǎn)接在斜面中部偏下方處。適用于擴(kuò)散型生長(zhǎng)及絨毛狀氣生菌絲類霉菌(如毛霉、根霉等)。

    2.1.2 中央劃線

    從斜面中央自下而上劃一直線。適用于細(xì)菌和酵母菌等。

    2.1.3 稀波狀蜿蜒劃線法

    從斜面底部自下而上劃“之”字形線。適用于易擴(kuò)散的細(xì)菌,也適用于部分真菌。

    2.1.4 密波狀蜿蜒劃線法

    從斜面底部自下而上劃密“之”字形線。能充分利用斜面獲得大量菌體細(xì)胞,適用于細(xì)菌和酵母菌等。

    2.1.5 挖塊接種法

    挖取菌絲體連同少量培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)接到新鮮斜面上。適用靈芝等擔(dān)子菌類真菌。

    2.2 穿刺接種

    用接種針從原菌種斜面上挑取少量菌體,從柱狀培養(yǎng)基中心自上而下刺入,直到接近管底(勿穿到管底),然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針。適用于細(xì)菌和酵母菌等。

    2.3 液體接種

    挑取少量固體斜面菌種或用無(wú)菌滴管等吸取原菌液接種于新鮮液體培養(yǎng)基中。

    3 培養(yǎng)

    將接種后的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中,在適宜的條件下培養(yǎng)至細(xì)胞穩(wěn)定期或得到成熟孢子。細(xì)菌培養(yǎng)溫度一般為30~37℃,真菌培養(yǎng)溫度一般為25~28℃。 4 保藏 培養(yǎng)好的菌種于4~6℃保存,根據(jù)要求每3~6個(gè)月移植一次。

    某些菌種,如芽裂酵母,阿舒假囊酵母,棉病囊霉等,須1~3個(gè)月移植一次。 保藏濕度用相對(duì)濕度表示,通常為50%~70%。 斜面菌種應(yīng)保藏相繼三代培養(yǎng)物以便對(duì)照,防止因意外和污染造成損失。

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