大鼠破骨細胞
細胞基本屬性:
產品名稱 | 大鼠破骨細胞 | 組織來源 | 關節(jié)組織 |
種屬 | 大鼠 | 生長特性 | 貼壁生長 |
形態(tài)特征 | 多核巨細胞 | 英文名稱 | Rat Osteoclast Cells |
貨號 | EY-XY3477 | 規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 |
質量檢測:抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)為陽性,純度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等
產品規(guī)格:5x105cells/T25或1mL凍存管
培養(yǎng)基:大鼠破骨細胞培養(yǎng)基
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
換液頻率:每2-3天換液一次
消化液:0.25%
產品貨期現貨,1周左右
運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞(包郵)
供應限制僅限于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
背景介紹:
大鼠破骨細胞采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導法制備而來,大鼠破骨細胞分離自骨組織和骨髓;破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞,位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng),其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡,若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構、功能探討骨吸收,形成相互平衡的機制。但破骨細胞是一種終末分化細胞,屬于不增殖細胞群,不能增殖和傳代,只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短。 |
原代細胞的分離培養(yǎng):
原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細胞、組織或器官,讓它們在體外維持與生長。原代培養(yǎng)的特點是細胞或組織剛離開機體,它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變,在一定程度上可反映它們在體內的狀態(tài),表現出來源組織或細胞的特性, 因此用于藥物實驗,尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等,是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。
(一)組織塊培養(yǎng)法
許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng),因為方法簡單,細胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌,有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后, 即可進行傳代。
1. 設備材料
培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺/無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、消化液、基礎培養(yǎng)液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。
2. 操作步驟
(1) 在無菌條件下,取待培養(yǎng)的組織適量,置入小燒杯中, 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次,去掉組織塊表面的血污。
(2)用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
(3)再用Hanks 溶液反復漂洗, 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉,將燒杯傾斜,用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
(4)用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml)的培養(yǎng)液再清洗,用吸管吸干后加入5ml 含20%血清的培養(yǎng)液。
(5)用彎頭吸管吸取組織小塊,均勻地置于培養(yǎng)皿內表面,吸去多余的培養(yǎng)液,各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋,做好標記, 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內。
(6) 2~4h 后,于超凈工作臺中,緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20%血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml )的培養(yǎng)液少量,以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中。
(7)輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱, 如無特殊情況,不必觀察。1~2 周后,可觀察到細胞從組織塊邊緣長出,形成生長暈。
(9) 一般說來,若培養(yǎng)液無明顯改變, 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養(yǎng)皿內表面,即可進行傳代培養(yǎng)。
操作方法:
組織塊直接培養(yǎng)法(原代細胞培養(yǎng)實驗)
材料與儀器
【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎,10-13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞,成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品:1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS)1瓶;100ml 0.25%瓶;PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個;3、50ml離心筒2個4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個5、1ml,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數板1塊;7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;8、酒精燈1臺;
步驟
1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1-2個胚胎轉移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中,用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,用PBS漂洗。3)在無菌狀態(tài)下,將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25%的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中,該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液,1200r/rain,5分鐘,棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞,按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。
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