Rat TARC Elisa試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿及相關液體
性能:
1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
原理:
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品,并加入 HRP 標記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度(OD 值),根據標準曲線,計算測試樣品中 ABP 濃度。
試劑盒組成:
結果判斷與分析:
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
ELISA試劑盒為什么要嚴格按照說明書操作?
一.先說最嚴重的操作錯誤,看錯或壓根不看試劑盒配套說明書,不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當作雙抗體夾心法來做,導致的結果就是整板顯示很強的藍色,無任何梯度。
二.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,所含的試劑成分很可能是不一樣的,混用導致的結果是,浪費珍貴的樣本,樣品的回收率達不到預期值,如果混用不同試劑盒的酶復合物,會導致顯色過弱或過強,因為每種試劑盒所用酶復合物效價可能不一樣。
三.不看文獻或者不做預實驗。比如某個試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻報道推算樣本應該1:10稀釋,結果稀釋成1:1000,導致的結果是顯色過弱,結果不可用。
車.不校準移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導致工作試劑濃度不準確,孵育溫度不合適,實驗帶來誤差。
五.洗滌不充分,每孔洗液加樣過少,或者殘留。導致的結果是顯色過快,同時背景較高。
六.手洗板時所用槍頭沒有懸空加入洗液,導致洗液污染,整個實驗失敗。
七.剩余酶標板條未及時放入干燥袋,導致酶標板受潮,下一次再做時,顯色過弱或污染,CV值過高。
八.試劑盒保存條件不當。試劑盒要求放4℃的,放在了-20℃。或者要求放-20℃的,放在了4℃。均會導致試劑盒敏感性下降。
以上只是最常見的操作錯誤。順利完成一次ELISA實驗需要注意的細節(jié)很多,許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測的質量。
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操作步驟:
1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
2. 分組:取出 96 孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設標準
品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。
注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。
3. 加樣:依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul
的待測樣本。
4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液(空白對照孔除外)。
5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標板 5 次,用吸水紙拍干。
7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止:25-37℃下避光反應 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。
9. 讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
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