型 號
產(chǎn)品時間2023-11-11
所屬分類Rat/大鼠Elisa試劑盒
報(bào)價1300
Rat eNOS-3ElisaKit
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿及相關(guān)液體
原理:
采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板,制成固相載體,實(shí)驗(yàn)時依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度(OD 值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算測試樣品中 ABP 濃度。
試劑盒組成:
性能:
1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié)果判斷與分析:
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
操作步驟:
1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)
品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul
的待測樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。
5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙拍干。
7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。
9. 讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
ELISA試劑盒為什么要嚴(yán)格按照說明書操作?
一.先說最嚴(yán)重的操作錯誤,看錯或壓根不看試劑盒配套說明書,不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來做,導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色,無任何梯度。
二.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,所含的試劑成分很可能是不一樣的,混用導(dǎo)致的結(jié)果是,浪費(fèi)珍貴的樣本,樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值,如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物,會導(dǎo)致顯色過弱或過強(qiáng),因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價可能不一樣。
三.不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋,結(jié)果稀釋成1:1000,導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過弱,結(jié)果不可用。
車.不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確,孵育溫度不合適,實(shí)驗(yàn)帶來誤差。
五.洗滌不充分,每孔洗液加樣過少,或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過快,同時背景較高。
六.手洗板時所用槍頭沒有懸空加入洗液,導(dǎo)致洗液污染,整個實(shí)驗(yàn)失敗。
七.剩余酶標(biāo)板條未及時放入干燥袋,導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮,下一次再做時,顯色過弱或污染,CV值過高。
八.試劑盒保存條件不當(dāng)。試劑盒要求放4℃的,放在了-20℃?;蛘咭蠓?20℃的,放在了4℃。均會導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。
以上只是最常見的操作錯誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意的細(xì)節(jié)很多,許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量。
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