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線粒體檸檬酸(MCA)含量生化檢測試劑盒

型 號

產(chǎn)品時間2023-11-07

所屬分類三羧酸循環(huán)系列

報價300

產(chǎn)品描述:線粒體檸檬酸(MCA)含量生化檢測試劑盒CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強度的主要指標(biāo)之一。

產(chǎn)品概述

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產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

線粒體檸檬酸(MCA)含量生化檢測試劑盒

100/96 50/48 25/24

EY-01S1147

 

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測定意義:

CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強度的主要指標(biāo)之一。

配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進行狀況。

測定原理:

CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。





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試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。


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1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。


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(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。


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