注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:同豬皰疹病毒型豬巨細(xì)胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Porcine Cytomegalovirus (PCMV,2)PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
同豬皰疹病毒型豬巨細(xì)胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
羅丹寧英文名稱: Rhodanine其他名稱: Argenton;2-Thio-4-thiazolidine;Rhodanic acid;4-Oxo-thiazolidine-2-thione產(chǎn)品規(guī)格: CP包 裝: 25克CAS號(hào):141-84-4C3H3NOS2=133.19
N-甲基吩嗪甲基硫鹽其他名稱: N-甲基二并吡嗪甲基硫鹽;吩嗪二甲酯硫鹽;5-甲基吩嗪硫甲酯;吩嗪硫甲酯;甲硫吩嗪;硫甲酯吩嗪英文名稱: PMS其他名稱: Phenazine methosulfate;N-Methylphenazinium methylsulfate;N-Methyldibenzopyrazine methyl sulfate salt;5-Methylphenazinium產(chǎn)品規(guī)格: 高純,98%包 裝: 1克/5克/25克CAS號(hào):299-11-6
三基氧化膦中文名稱: 三基氧化膦其他名稱: 三基氧膦;2-乙醇;三基磷氧;氧化三磷;氧化三膦英文名稱: Triphenylphosphine oxide產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%包 裝: 25克/100克/500克CAS號(hào):791-28-6
皂土英文名稱: Bentonite其他名稱: Wilkinite;Denver clay;Paper clay產(chǎn)品規(guī)格: CP包 裝: 500克CAS號(hào):1302-78-9Al2O3.4(SiO2).H2O=360.31
碳化其他英文名稱: Tetraboron carbide產(chǎn)品規(guī)格: CP,90%包 裝: 100克/500克CAS號(hào):12069-32-8CB4=55.26級(jí)別:CP
三氧化二其他名稱: 氧化;酐;三氧化;酐英文名稱: Boron oxide其他名稱: Diboron trioxide;Boron trioxide;Boric anhydride;Boric oxide;Boron sesquioxide產(chǎn)品規(guī)格: 4N包 裝: 10克產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%
玻璃纖維英文名稱: Glass Fiber其他名稱: Fiber Glass Wool產(chǎn)品規(guī)格: BR包 裝: 250克CAS號(hào):65997-17-3SiO2=60.08
喹吖因二鹽鹽英文名稱: Quinacrine dihydrochloride其他名稱: 6-Chloro-9-(4-diethyl-ami-methylbutylamino)-2-metho-xyacridine dihydrochloride;Meparcrine hydrochloride;3-Chloro-7-methoxy-9-(1-methyl-4-diethylamino-butylamino)acridine dihydrochloride;Italchin;Erion;Acriquine;Metoquine產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%包 裝: 5克/25克CAS號(hào):69-05-6C23H30C1N3O·2HCl=472.89
同豬皰疹病毒型豬巨細(xì)胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格Methyl L-lysinate dihydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
3-Bromobenzyl alcohol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
4-AMIDINOBENZAMIDE HYDROCHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格:>94.0%(GC)
2-Amino-5-nitropyrimidine 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
L-Cysteine methyl ester hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)
Methacrylatoethyl trimethyl ammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格:
NA 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
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