注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:皮里陶病毒PCR檢測試劑盒哪家代理
英文名稱:Pirital virus(PIRV)RTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒哪家代理原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
鉑英文名稱: Hexachloroplatinic(Ⅳ) acid hexahydrate其他名稱: Hydrogen hexachloroplatinate(Ⅳ) hexahydrate;Dihydrogen hexachloroplatinate(Ⅳ) hexahydrate;Hydrogen hexachloroplatinate(IV);Hexachloroplatinic(IV) acid產(chǎn)品規(guī)格: AR,37%包裝:1克CAS號:18497-13-7H2PtCl6·6H2O=517.90
氧化鐵其他名稱: 三氧化二鐵;紅色氧化鐵;氧化高鐵;205鐵紅;磁性氧化鐵紅;燒褐鐵礦;鐵丹;紅粉;威尼斯紅英文名稱: Iron(III)oxide其他名稱: Ferric oxide;Iron oxide red;Red iron trioxide產(chǎn)品規(guī)格: 4N包裝:10克產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%
硫鐵英文名稱: Ferric sulfate其他名稱: Iron(III)sulfate; Ferric persulfate;Ferric sesquisulfate;Ferric tersulfate產(chǎn)品規(guī)格: AR,21-23%包裝:500克CAS號:15244-10-7或10028-22-5Fe2(SO4)3=399.88
硫化亞鐵英文名稱: Ferrous sulfide其他名稱: Iron(II)sulfide; Iron sulfide(ferrous);Iron protosulfide;Iron sulfuret產(chǎn)品規(guī)格: CP,70%包裝:500克CAS號:1317-37-9FeS=87.91
氫氧化鐵英文名稱: Ferric hydroxide其他名稱: Iron hydroxide產(chǎn)品規(guī)格: CP包裝:500克CAS號:1309-33-7FeO2H=88.85
四氧化三鐵英文名稱: Ferrosoferric oxide其他名稱: Iron(II,III)oxide; Iron oxide magnetic;Ferric oxide magnetic;Iron ethiops;Black rouge;Iron oxide black;Ferric ferrous oxide;Triiron tetraoxide;Ethiops iron產(chǎn)品規(guī)格: CP,98%包裝:500克CAS號:1317-61-9Fe3O4=231.53
鈦鐵試劑英文名稱: Tiron其他名稱: 1,2-Dihydroxybenzene-3,5-disulfonic acid disodium salt hydrate;Pyrocatechol-3,5-disulfonic acid disodium salt hydrate;Disodium 4,5-dihydroxy-1,3-benzenedisulfonate hydrate產(chǎn)品規(guī)格: AR包裝:25克CAS號:149-45-1C6H4Na2O8S2.H2O=332.22
硫化鉛英文名稱: Lead(II)sulfide其他名稱: Plumbous sulfide產(chǎn)品規(guī)格: SP包裝:5克產(chǎn)品規(guī)格: AR,82%包裝:50克/250克
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒哪家代理N-Methylformamide 質(zhì)量規(guī)格:>95%(TPO Method)
2,4,6-Trichlorophenylhydrazine 質(zhì)量規(guī)格:>97%(TPO Method)
3-(N-Boc-aminomethyl)azetidine 質(zhì)量規(guī)格:>95%(TPO Method)
pedunculoside 質(zhì)量規(guī)格:>95%(TPO Method)
N'-Nitro-L-arginine 質(zhì)量規(guī)格:>95%(TPO Method)
1-Methoxy-2-propanol 質(zhì)量規(guī)格:>97%(TPO Method)
H-CYS(TRT)-2-CLTRT RESIN 質(zhì)量規(guī)格:>95%(TPO Method)
2-Chloro-4-iodopyridine 質(zhì)量規(guī)格:>95%(TPO Method)
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