注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Ovine Ecthyma Virus(Orf)PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測(cè)試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
9-芴其他名稱(chēng): 芴;亞聯(lián)基甲;9H-芴-9-;芴氧;二并五環(huán);9-側(cè)氧茀英文名稱(chēng): 9-Fluorenone其他名稱(chēng): Fluorene ketone;Diphenylene ketone;9-Oxofluorene;Ketofluorene;Fluorenone產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%包裝:25克/100克/500克CAS號(hào):486-25-9
2-乙中文名稱(chēng): 2-乙其他名稱(chēng): 鄰乙英文名稱(chēng): 2'-Fluoroacetophenone其他名稱(chēng): 1-(2-Fluorophenyl)ethanone產(chǎn)品規(guī)格: 特純,97%包裝:5克/25克/100克/500克
α-紫羅其他名稱(chēng): 甲位紫羅蘭;alpha-紫羅蘭;4-(2,6,6-*基-2-環(huán)己烯基-1-基)-3-丁烯-2-;α-紫羅蘭香;α-芷香;α-呫辛英文名稱(chēng): α-Ionone其他名稱(chēng): alpha-Jonone;4-(2,6,6-Trimethyl-2-cyclohexen-1-yl)-3-buten-2-one產(chǎn)品規(guī)格: BR,90%包裝:100克/500克CAS號(hào):127-41-3
4-甲氧基乙英文名稱(chēng): 4-Methoxyacetophenone其他名稱(chēng): p-Acetoanisole;4-Acetylanisole;Acetanisol產(chǎn)品規(guī)格: CP,98%包裝:100克/500克/1公斤CAS號(hào):100-06-1C9H10O2=150.18
1-甲基-2-吡咯英文名稱(chēng): NMP其他名稱(chēng): 1-Methyl-2-pyrrolidinone;1-Methyl-2-pyrrolidone;N-Methyl-2-pyrrolidone;M-PYROL產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%包裝:500毫升CAS號(hào):872-50-4C5H9NO=99.13
α-萘黃其他名稱(chēng): 7,8-并黃;并黃素;萘黃;2-基-7,8-并色英文名稱(chēng): α-Naphthoflavone其他名稱(chēng): 7,8-Benzoflavone;2-Phenyl-4H-naphtho[1,2-b]pyran-4-one;Benzo[h]flavone產(chǎn)品規(guī)格: GR,97%包裝:1克/5克CAS號(hào):604-59-1
4-硝基乙英文名稱(chēng): 4-Nitroacetophenone其他名稱(chēng): p-Nitroacetophenone;1-(4-Nitrophenyl)ethanone產(chǎn)品規(guī)格: CP包裝:25克/100克/500克CAS號(hào):100-19-6C8H7NO3=165.15
2-壬其他名稱(chēng): 甲基庚基甲;甲基庚甲;甲基庚基;2-基壬;甲庚英文名稱(chēng): 2-Nonanone其他名稱(chēng): 2-Ketononane;Methylheptylketone;Heptyl methyl ketone產(chǎn)品規(guī)格: GR,98%包裝:25毫升/100毫升/500毫升CAS號(hào):821-55-6
同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測(cè)試劑盒3,4-Dimethylbenzophenone 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
N-Boc-L-Histidine 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
CINNAMYL FORMATE 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
Vaseline 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Costus oil 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
Isoliquiritigenin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
N-(Tris(hydroxymethyl)methyl)-2-aminoethanesulfonic acid sodium salt 質(zhì)量規(guī)格:檢查
4-NITROTHIOANISOLE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查
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