參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測(cè)試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品僅用于科研特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
次亞磷酸鈉/二氫鈉/卑磷酸鈉/Sodium hypophosphiteAR,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7681-53-0RT
偏硼酸鈉/四水合偏硼酸鈉/Sodium metaborate tetrahydrateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10555-76-7RT
偏磷酸鈉/二縮原偏磷酸鈉/Sodium metaphosphateCP,93.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10361-03-2RT
三偏磷酸鈉/磷酸三間酯/偏磷酸三鈉/Trisodium trimetaphosphateCP,65%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7785-84-4RT
原釩酸鈉/正釩酸鈉/釩酸鈉/Sodium orthovanadateCP,45.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13721-39-6RT
無(wú)水磷酸鈉/無(wú)水磷酸三鈉/三堿式磷酸鈉/原磷酸三鈉/正磷酸鈉/磷酸鈉/TSPCP,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7601-54-9RT
磷鎢酸鈉/十二鎢酸磷酸鈉水合物/十二鎢磷酸鈉/Sodium phosphotungstateAR,86.8%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,51312-42-6RT
多聚磷酸鈉/三聚磷酸鈉/三磷酸五鈉/三磷酸鈉/磷酸五鈉/三聚磷酸五鈉/多磷酸鈉/STPPCP,56%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7758-29-4RT
焦硫酸鈉/Sodium pyrosulfateAR,40%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13870-29-6RT
錫酸鈉/Sodium stannateAR,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,12058-66-1RT
鎢酸鈉/鎢酸鈉二水合物/正鎢酸鈉/Sodium tungstate dihydrateAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10213-10-2RT
1-萘磷酸鈉鹽/α-萘磷酸鈉/1-萘酚磷酸單鈉鹽/1-磷酸萘基酯單鈉鹽單水合物/1-Naphthyl phsophoric acid sodium saltBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,81012-89-72~8℃
2-萘磷酸鈉鹽/2-萘磷酸單鈉鹽/β-萘磷酸鈉/2-萘基磷酸鈉/2-萘基磷酸一鈉鹽/2-Naphthyl phosphate sodium saltBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,14463-68-4保存:-20℃
酒石酸氫鈉/重酒石酸鈉/酸性酒石酸鈉/2,3-二羥基-[R-(R*,R*)]-丁二酸單鈉鹽/一水酒石酸氫鈉/Sodium bitartrate monohydrateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,526-94-3或6131-98-2RT
改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測(cè)試劑盒5-Bromo-2-nitropyridine 質(zhì)量規(guī)格:辣椒堿含量HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate 質(zhì)量規(guī)格:辣椒總堿>98%,辣椒單堿>55%
2-Hydroxypropyl methacrylate 質(zhì)量規(guī)格:>99%
5-BROMO-4-CHLORO-3-INDOLYL PHOSPHATE DISODIUM SALT 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
CADMIUM BROMIDE TETRAHYDRATE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95.50%,標(biāo)準(zhǔn)品
Thiophosphoric acid O,O-diethyl S-benzyl ester 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Rhodium(II) trifluoroacetate dimer 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
3,4-Dimethylaniline 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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