注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:住白細(xì)胞原蟲(chóng)屬通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Leucocytozoon spp.PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
住白細(xì)胞原蟲(chóng)屬通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
FMOC-D-纈氨酸/芴甲氧羰基-D-纈氨酸/Fmoc-D-Val-OH特純,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,84624-17-92~8℃
對(duì)氯苯甘氨酸/DL-對(duì)氯苯甘氨酸/PCPGBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6212-33-5RT
DL-鄰氯苯甘氨酸/DL-2-氯苯甘氨酸/混旋鄰氯苯甘氨酸/DL-2-(2-Chlorophenyl)glycineBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,141196-64-7RT
L-鄰氯苯甘氨酸/(S)-2-氯苯甘氨酸/L-(+)-鄰氯苯甘氨酸/S-(+)-鄰氯苯甘氨酸/L(-)-鄰氯苯甘氨酸/右旋鄰氯苯甘氨酸/L-(+)-2-ChlorophenylglycineBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,141315-50-6RT
N-苯甲酰-L-纈氨酰甘氨酰-L-精氨酸對(duì)硝基苯胺鹽酸鹽/N-BZ-Val-Gly-Arg PNA•HC1BR,98%5毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,64815-80-1保存:-20℃
D-纈氨酰-L-白氨酰-L-賴氨酸對(duì)硝基苯酸鹽/D-纈氨酰-L-亮氨酰-L-賴氨酰對(duì)硝基苯胺酸鹽/D-Val-Leu-Lys PNA•2HC1BR,98%5毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,62354-43-2保存:-20℃
Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰對(duì)硝基苯胺醋酸鹽/Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰對(duì)硝基苯胺乙酸鹽/Z-Gly-Pro-Arg PNA acetate saltBR,98%25毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,102679-70-9保存:-20℃
肌氨酸鈉/N-甲基氨基乙酸鈉/N-甲基甘氨酸單鈉鹽/N-甲基甘氨酸鈉/sodium SarcosineBR,98%25毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,4316-73-8RT
L-天門冬氨酸鈣/L-天冬氨酸鈣/生力鈣/L-Aspartic acid calcium saltBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,39162-75-9RT
L-谷氨酸-5-甲酯/L-谷氨酸γ-甲酯/L-γ-谷氨酸甲酯/L-2-氨基戊二酸-5-甲酯/L-Glutamic acid 5-methyl esterBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1499-55-42~8℃
N-芐基甘氨酸乙酯/N-Benzylglycine ethyl esterBR,97%25克國(guó)產(chǎn)6436-90-4RT
L-叔亮氨酸/L-2-氨基-3,3-二甲基丁酸/L-tert-LeucineBR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,20859-02-3RT,避光
L-叔亮氨酸鹽酸鹽/(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸鹽酸鹽/L-tert-Leucine hydrochlorideBR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,139163-43-2RT,避光
L-高絲氨酸/(S)-2-氨基-4-羥基丁酸/L-類絲氨酸/L-2-氨基-4-羥基丁酸/L-HomoserineBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,672-15-1RT,避光
住白細(xì)胞原蟲(chóng)屬通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格脫纖維血,500mlMagnesium silicate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,日本進(jìn)口原裝
脫纖維馬血,100ml2-Bromo-2-methylpropane 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
脫纖維馬血,500mlSEC-BUTYLBENZENE 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
TBS-葡萄糖溶液,500mlBENZENESULFONYL ISOCYANATE 質(zhì)量規(guī)格:飛薊素UV 80%;單賓30%
LB Lennox培養(yǎng)基粉劑,1L1,2-DIMETHYLHYDRAZINE DIHYDROCHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:飛薊素UV 80%;雙賓30%
LB Lennox培養(yǎng)基,500mlFMOC-L-ALANINOL 質(zhì)量規(guī)格:BR,20%溶液
LB培養(yǎng)基粉劑,1L4-HYDROXY-3-METHOXYPHENYL-LACTIC ACID SODIUM SALT 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
LB培養(yǎng)基,500mlSodium allylsulfonate 質(zhì)量規(guī)格:>98%
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