注意事項:
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:巴西利什曼蟲哪家代理
英文名稱:Leishmania braziliensis
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
巴西利什曼蟲哪家代理原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
苯甲氧羰酰琥珀酰亞胺/芐基-N-琥珀酰亞胺基碳酸酯/N-(芐氧羰基氧基)琥珀亞胺/N-芐基琥珀酰亞胺碳酸酯/N-芐氧羰氧基丁二酰亞胺/N-(芐羰氧基)丁二酰胺/芐基琥珀酰亞胺基碳酸酯/N-芐氧羰基氧基琥珀酰亞胺/CBZ-OSU/Z-OSU/Z-ONSuBR,99%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13139-17-8RT
硫酸-5-羥色胺肌酐/5-羥色胺肌酸酐硫酸鹽/5-羥色胺肌氨酸酐硫酸鹽一水合物/5-HTBR,99%500毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,61-47-22~8℃,避光
4-氨基馬尿酸鈉/對氨基馬尿酸鈉/4-氨基苯甲酰胺基乙酸鈉/4-氨基苯甲?;拾彼徕c/對氨馬尿酸鈉/Sodium 4-aminohippurateBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,94-16-6RT,避光
色胺/3-(2-氨乙基)吲哚/β-吲哚基乙胺/2-(3-吲哚基)乙胺/TryptamineBR,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,61-54-12~8℃,避光
酪胺鹽酸/對羥基苯乙胺鹽酸鹽/鹽酸酪胺/Tyramine hydrochlorideBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,60-19-5RT
亞氨基二乙酸/亞氨二醋酸/N-(羧甲基)甘氨酸/氨二乙酸/二乙酸亞胺/二羧甲基胺/IDABR,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,142-73-4RT
甘氨酰-脯氨酰-對硝基苯胺對甲苯磺酸鹽/GPDABR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,65094-46-0保存:-20℃
五肽胃泌素/五肽促胃液素/N-[(1,1-二甲乙氧基)羰基]-β-丙氨酰-L-色氨酰-L-甲硫氨酰-L-門冬氨酰-L-苯丙酰胺/PentagastrinBR,98%25毫克國產(chǎn)5534-95-22~8℃
O-苯并三氮唑-N,N,N,N,-四甲脲六氟磷酸酯/O-(IH-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基異脲六氟化磷/苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯/O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基硫尿六氟磷酸鹽/苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽/HBTUBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,94790-37-1RT
N-乙酰-L-蛋氨酸/N-乙酰-L-甲硫氨酸/N-乙?;?L-蛋氨酸/醋酸基甲硫氨酸/L(-)-N-乙酰甲硫氨基丁酸/L(-)-N-乙酰甲硫氨酸/N-乙酰-L-甲硫氨基酸/NAMBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,65-82-7RT
L-高精氨酸鹽酸鹽/L-Homoarginine hydrochlorideBR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1483-01-8RT
甘氨酸鋅/甘氨酸絡(luò)合鋅/甘氨酸螯合鋅/2水甘氨酸鋅/Zinc GlycinateBR,99%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:7214-08-6RT
甘氨酸鎂/甘氨酸鎂螯合物/Magnesium GlycinateBR,99%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,14783-68-7RT
甘氨酸鈣/甘氨酸鈣螯合物/Calcium GlycinateBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,35947-07-0RT
巴西利什曼蟲哪家代理雙(2-氧代-3-惡唑烷基)次磷酰氯,5gOPHIOPOGONIN D 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
叔丁氧羰基-甲苯磺?;?精氨酸,100gDihydroartemisinin 質(zhì)量規(guī)格:>98%
叔丁氧羰基-甲苯磺?;?精氨酸,25gEthyl fluoroacetate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
叔丁氧羰基-甲苯磺?;?精氨酸,5gBasic Orange 14 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(LC),*
N-芴甲氧羰基-N'-甲苯磺?;?L-精氨酸,1g2,3-DIAMINONAPHTHALENE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品
N-芴甲氧羰基-N'-甲苯磺?;?L-精氨酸,25gPhytolaccagenin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
N-芴甲氧羰基-N'-甲苯磺?;?L-精氨酸,5gCinnamaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
其他生化試劑,1-(4-Chlorophenyl)piperazine dihydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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