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丙酮酸脫羧酶(PDC)生化檢測試劑盒

型 號

產(chǎn)品時(shí)間2023-11-05

所屬分類輔酶Ⅰ系列

報(bào)價(jià)300

產(chǎn)品描述:丙酮酸脫羧酶(PDC)生化檢測試劑盒PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

產(chǎn)品概述

商品屬性:

產(chǎn)品名稱:丙酮酸脫羧酶(PDC)生化檢測試劑盒

規(guī)格:100/96 50/48 

貨號 : EY-01S19

測試方法:微量法 紫外分光光度法  

分類:輔酶系列

商品詳情:

測定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計(jì)算PDC活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

5.png



ADH測定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。

測定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

3、操作表:

試劑名稱μL

測定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10


將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬。

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