介紹一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。
背景:目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟,需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育半小時,然后42度熱激90秒,加液體培養(yǎng)基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴格,熱激后大量菌細胞死亡,還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。
方法改進:我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育的同時,將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里,當撫育結(jié)束后,立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上,利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激,平板可以直接放回培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。由于溫度相對溫和,細胞死亡的少,之后的液體培養(yǎng)基撫育過程也省掉了。
這個方法我們一直在用,質(zhì)粒可以成功轉(zhuǎn)進菌體中,只要感受態(tài)細胞沒有問題,其轉(zhuǎn)化率和使用熱激法差不多,而且若是新鮮制備的感受態(tài)細胞,轉(zhuǎn)化率甚至更高??梢允∠?2度水浴裝置的儀器,還節(jié)省了至少1個小時的時間。
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