PBS的清洗方式選擇. 次數(shù)和時間的選擇?
(1)單獨沖洗,防止交叉反應(yīng)造成污染。 臨床上每天檢測的病例很多,所用的抗體種類及項目也多,如果在加入一抗孵育完后,將它們在一個缸內(nèi)洗,這樣就會造成交叉污染,影響zui后的結(jié)果。正確的做法是單獨地進行沖洗,沖洗的PBS為一次性,保證切片沒有相互交叉污染的機會。
(2)溫柔沖洗,防止切片的脫落。 沖洗切片,取出切片,將PBS從上輕輕地沖洗,讓PBS自上而下流下來,不要拿起切片將PBS對準切片沖洗,這樣由于沖出的PBS有一定的沖擊力,很容易使切片周邊引起松動,導致切片的脫落。抗體
(3)沖洗的時間要足夠,才能*洗去結(jié)合的物質(zhì)。 沖洗切片有人提出用微振蕩器振染,振下未結(jié)合的各種物,使之不產(chǎn)生背景,此種做法一是浪費時間,二是很容易導致切片的脫落。切片的沖洗據(jù)實踐認為,用一小燒杯柔和地于切片上沖洗,就能*沖洗去未結(jié)合的物質(zhì),無需附加其它條件,沖洗好于切片上再注入PBS,持續(xù)2分鐘左右就*足夠了。
(4)PBS的PH和離子強度的使用和要求。 劉彥仿指出:中性及弱鹼性條件(PH7-8)有利于免疫復合物的形成,而酸性條件則有利于分解;低離子強度有利于免疫復合物的形成,而高離子強度則有利于分解。免疫組化P56我們目前常用的PBS的PH在7.4-7.6濃度是0.01 M,根據(jù)本室十幾年來的使用情況,認為該溶液價格便宜配制方面,使用效果好。
(5)常用試劑的配制和使用。 在免疫組織化學的染色過程中,用得zui多的試劑就是緩沖液,因為切片在整個染色中,抗體的加. 換. 切片的沖洗,DAB的配制都離不開緩沖液。可見緩沖液在整個染色中都起至關(guān)鍵的作用,緩沖液的過酸或偏堿,都將影響染色的結(jié)果。
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