? 冰凍切片是指將組織在冷凍狀態(tài)下直接切片。
? 在切片前組織不經(jīng)過任何化學(xué)藥品處理或加熱過程。
– 縮短了制片時間
– 抗原性不受損失
? 對穩(wěn)定性差的抗原,如淋巴細胞表面抗原尤其適合。
? 組織凍結(jié)過程中,細胞內(nèi)、外的水分會形成冰晶,凍結(jié)的速度愈慢,冰晶顆粒愈大,可嚴重影響組織、細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此制備凍塊時要求低溫、速凍。
1、冰凍組織塊的常用方法
? 液氮中冰凍:組織投入液氮中 (一196?C)中10~20sec;
? 干冰中加入丙酮(或異戊烷),液體立即氣化起泡,溫度降至一70?C ,將組織投入,若在干冰丙酮中置一盛有異戊烷的容器,組織投入該容器內(nèi)結(jié)凍則更好;
– 上述組織在速凍時應(yīng)浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內(nèi),以保護組織。
– 制成凍塊后若需保存,應(yīng)以鋁箔或塑料薄膜封包,貯存于-70 ?C冰箱。
2、切片
? 供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整,并有連續(xù)性。
? 載玻片也應(yīng)清潔無油污,但一般無需涂抹粘附劑;
? 切片時,使用恒溫冷凍切片機,在箱內(nèi)溫度-25 ?C 。切片厚度一般為4~8?m。
3、切片后處理
? 切好的冰凍切片,室溫下自然晾干1~2h后,入4?C丙酮固定10min,待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃。細胞
? 由于切片技術(shù)要求較高,不易得到連續(xù)性很好的切片,其形態(tài)結(jié)構(gòu)亦不如石蠟片,且凍塊和切片不便于長期貯存,因此的應(yīng)用受限。
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