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    免疫學(xué)抗體實驗室方法

    點擊次數(shù):805  更新時間:2015-07-10

    抗體作為實驗試劑已有很多年了??梢园l(fā)展專門針對想要抗原的特殊抗體。另外,抗體試劑與抗原相互作用的結(jié)合通常具高親和力,這就使得檢測很少量靶抗原成為可能。典型的靶蛋白是:高度純化的蛋白質(zhì)、糖蛋白、或這些分子復(fù)雜異質(zhì)的混合物(如豚草屬花粉)。

    由于抗原結(jié)合區(qū)與效應(yīng)分子的功能決定區(qū)在不同的區(qū)域,所以,免疫球蛋白(Igs)在基因和分子水平實際上是組合結(jié)構(gòu)。例如,把編碼某一特定恒定區(qū)的基因和許多編碼可變區(qū)的基因中的任何一個相連,這一特定恒定區(qū)介導(dǎo)補體結(jié)合的能力能夠得以維持同時仍能被地定為靶目標(biāo)。因此,無論是由恒定區(qū)基因決定的防御機制,還是由許多可變區(qū)基因決定的結(jié)合抗原的特異性,Ig的基因家族都成功地保持了恒定。其中,可變區(qū)基因在進化期間已增加了很多,同時通過基因復(fù)制和體細(xì)胞突變,也擴充了許多。

    同類抗體(異構(gòu)型),Ig分子的恒定區(qū)中含有共同的肽結(jié)構(gòu)。雖然這些抗體可以與不同的抗原起反應(yīng),但在免疫測定中,可以用同一抗體試劑檢測他們。例如,與兩種不同變應(yīng)原(如豚草屬花粉和貓的毛皮垢屑)起反應(yīng)的IgE抗體,它們兩者都可以用抗-IgE抗體來檢測。其中,該抗-IgE抗體能與所有IgE分恒定區(qū)的某一肽段特異性地結(jié)合(見后)。在這個例子中,雖然每種抗體都有不同的抗原結(jié)合位點,但它們的ε重鏈恒定區(qū)的某一肽段都能與抗-IgE抗體反應(yīng)。

    當(dāng)設(shè)計一個用抗原或抗體作試劑的免疫測定方法時,在選擇合適的分析方法方面,zui重要的因素是待測物(抗原或抗體)的濃度。臨床免疫實驗室zui常用的免疫化學(xué)方法有:(1)凝膠沉淀法和比濁法,用于濃度相對比較高的分析物(毫克到微克每毫升)(2)競爭性替代或免疫測定技術(shù),如放射性免疫測定(RIA)和酶免疫測定(EIA),用于較低濃度的分析物(微克到納克每毫升)。免疫熒光顯微技術(shù),包括流式細(xì)胞儀,對檢測細(xì)胞表面抗原或完整細(xì)胞內(nèi)某些細(xì)胞漿或細(xì)胞核抗原很有用。各種方法大致的靈敏度限度列在表31-1。如接下來這部分所描述的那樣,各種方法zui終都是以檢測抗原抗體之間的反應(yīng)為根據(jù)。

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