“雜音"染色種類繁多,產(chǎn)生的原因也多種多樣,為了便于說明,筆者將其歸納為下面幾種。
1、灶片狀著色
切片中著色區(qū)東一塊西一塊,呈灶片狀分布,出現(xiàn)這種問題的原因有:(1)裱片時水未排盡,在局部形成氣泡使組織突起,染色時試劑滲入后不易洗盡,顯色過深所致。解決辦法是,漂片盒里的氣泡應(yīng)去盡,晾片熱臺不能平放,應(yīng)有45度左右的斜度,利于水流走和蒸發(fā)。(2)壞死組織灶,組織壞死后細(xì)胞破壞、酶的釋放、蛋白游離、分解,復(fù)雜的肽鏈殘段(如Fc段)可能與一抗或/和二抗結(jié)合導(dǎo)致zui終著色。解決辦法是在選擇染色切片時應(yīng)避免選擇壞死組織較多的切片。(3)制作APES膠片時,膠的濃度太高,干燥后在玻片上留下白色小點(diǎn),顯色時白色小點(diǎn)著色。解決辦法是按照標(biāo)準(zhǔn)的制備方法進(jìn)行,即5%鹽酸酒精(5 ml鹽酸+95%酒精95 ml)浸泡玻片4小時、熱水沖洗玻片1小時、蒸餾水洗玻片1分鐘、丙酮浸泡玻片5秒鐘后空氣干燥(室溫)、2% APES(2 ml APES+98 ml丙酮)浸泡玻片5分鐘、玻片過一下丙酮(1-2秒鐘)、玻片過一下蒸餾水(1-2秒鐘)、37 度干燥、室溫儲存?zhèn)溆谩H绻破^程中,因丙酮逐漸揮發(fā)而膠變濃時可適當(dāng)加入一些丙酮。
2、3、細(xì)胞核著色
不適當(dāng)?shù)慕M織處理可以出現(xiàn)細(xì)胞核著色,如組織在二甲苯里浸泡時間太長(如從星期五浸泡到下星期一)、緩沖液中浸泡時間太長、組織變干、微波修復(fù)液的PH值和修復(fù)時間不當(dāng)或修復(fù)過程中修復(fù)液留下得太少,未沒過組織等。解決辦法是嚴(yán)格按照操作常規(guī)進(jìn)行工作。
4、間質(zhì)著色
著色部位主要在間質(zhì),間質(zhì)著色的原因很多,如抗體與組織中的蛋白質(zhì)因蛋白疏水基團(tuán)相互作用形成非特異性的連接而著色,加一抗前的血清封閉這一步就是為了避免非特異型的結(jié)合。又如血清中的免疫球蛋白常常滲出到組織間質(zhì),很容易與抗體結(jié)合,造成間質(zhì)著色,特別是lambda和kappa染色時。當(dāng)甲狀腺膠質(zhì)外溢到組織間質(zhì)時,做甲狀腺球蛋白染色也會出現(xiàn)間質(zhì)著色??贵w不純或抗體被污染也可出現(xiàn)間質(zhì)著色,我們曾遇到CD20抗體不純,除了染上B細(xì)胞外還染上了間質(zhì)。
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