ELISA試劑盒各組分的
診斷試劑盒主要組分的包括包被反應板、標記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟;并通過產品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質控過程來完成。
(一)固相載體的制備(因不同產品使用的包被載體有很大區(qū)別,在此以標準96孔微孔反應板為例進行描述)
1.包被板的準備
準備經檢驗合格的包被板,記錄批號、數目、狀態(tài)標識。
質控項目:尺寸,外觀,包裝。
2.包被液的配制
配制包被緩沖液,加入包被的抗體或抗原到工作濃度,混合均勻,即成所需的包被液,工作濃度的包被液應在規(guī)定時間內使用。
質控項目:包被緩沖液配方,pH值,包被物成份。
3.包被板的包被
包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數量。
質控項目:包被體積,溫度,時間,過程監(jiān)控。
4.洗板工作液的配制(按各單位工藝要求,可以不洗板)
按配方配制洗板工作液。
質控項目:洗板工作液配方,pH值。
5.封閉液的配制
按配方配制封閉液。
質控項目:封閉液配方,pH值。
6.洗板和封閉
包被完成后,抽去孔內包被液,用洗板工作液洗板后(按各單位工藝要求,可以不洗板),加入封閉液。
質控項目:封閉體積,溫度,時間,過程監(jiān)控。
質檢項目:封閉前檢驗包被均一性。
7.抽干
封閉后的反應板,抽干孔內液體。
質控項目:過程監(jiān)控。
8.干燥
反應板應按工藝的要求進行干燥。
質控項目:溫度,濕度,時間,過程監(jiān)控等。
9.密封包裝
將干燥后的反應板用鋁箔袋密封包裝,內放干燥劑(按各單位工藝要求,可以不放)。
質控項目:密封性能,標示及效期等。
10.反應板(半成品)檢驗
對裝袋密封后的反應板進行抽樣檢驗,外觀、板內變異、板間變異。
(二)滴配過程
1.酶結合物的制備(根據各產品實際情況,該步驟可不進行)
采用常規(guī)過碘酸鈉——乙二醇法將相關的抗體(或抗原)標記辣根過氧化物酶(或其他酶),酶標記后的抗體(或抗原)應加入適當的保護劑保存于低溫。
質控項目:標記方法,過程控制。
2.酶結合物的鑒定
(1) 功能性實驗
將酶結合物用酶稀釋液稀釋后,用于產品的滴配,其結果應符合相關試劑盒的質量標準。
(2) 穩(wěn)定性
將酶結合物用酶稀釋液稀釋,進行2-8℃,及熱穩(wěn)定性實驗,滴配結果應符合相關試劑盒的質量標準。
3.酶結合物稀釋液
按酶結合物稀釋液的配方配制,存放在2-8℃保存,并于規(guī)定時間內使用。
質控項目:酶結合物稀釋液配方,pH值。
4.酶結合物工作濃度的滴配
取酶結合物,用酶結合物稀釋液稀釋到不同的濃度,用已制備好的反應板進行滴配。測定系列標準品及相應的質控品,確定使體系達到*的酶結合物工作濃度。
5.酶結合物工作液配制
將所需量酶結合物和酶結合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。
質檢項目:分裝前檢驗,用配套的反應板進行檢驗,外觀、靈敏度、質控品測定值、定量產品應作校準品線性檢測。
6.酶結合物工作液的分裝
按工藝要求分裝酶結合物工作液。
質控項目:分裝前確認試劑名稱、批號、數量,分裝量,封裝后密封性。
7.酶結合物工作液(半成品)檢驗
對分裝后的酶結合物工作液進行抽樣檢驗,外觀、分裝量、靈敏度、ELISA試劑盒校準品劑量-反應曲線線性、質控品測定值。
(三) 校準品、陰陽性對照或質控品的制備
1.稀釋液
按稀釋液的配方配制,存放在2?8℃或-20℃保存,并于有效期內使用。
質控項目:稀釋液配方,pH值。
2.校準品、陰陽性對照或質控品的配制
校準品、陰陽性對照或質控品的配制要具有溯源性,可參照國家標準品、WHO標準品或其他級別的標準物質進行配制。
質檢項目:分裝前檢驗,準確性、劑量-反應曲線線性(定量產品)、質控品測定值。
3.校準品、陰陽性對照或質控品的分裝
按工藝要求分裝校準品、陰陽性對照或質控品。
質控項目:分裝前確認試劑名稱、批號、數量,分裝量。
4.校準品、陰陽性對照或質控品(半成品)檢驗
對分裝后的校準品、陰陽性對照或質控品進行抽樣檢驗,外觀、分裝量、準確性、劑量-反應曲線線性(定量產品)、質控品測定值。
(四) 化學發(fā)光底物的制備
1.底物緩沖液
按底物緩沖液的配方配制,存放在2-8℃保存,并于有效期內使用。
質控項目:底物緩沖液配方,pH值。
2.化學發(fā)光底物(氧化劑和發(fā)光劑)的配制
分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應的氧化劑和發(fā)光劑
質控項目:氧化劑和發(fā)光劑配方。
質檢項目:分裝前檢驗,本底、發(fā)光強度。
3.化學發(fā)光底物(氧化劑和發(fā)光劑)的分裝
按工藝要求分裝化學發(fā)光底物(氧化劑和發(fā)光劑)。
質控項目:分裝前確認試劑名稱、批號、數量,分裝量,封裝后密封性。
4.化學發(fā)光底物(半成品)檢驗
對分裝后的化學發(fā)光底物進行抽樣檢驗,外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強度。
(五)銪標記物的制備
針對不同的標記生物原料,確定不同的標記制備工藝,包括銪-DTTA與標記生物原料的比例,標記溫度和標記時間、標記得率的計算標準等。在實際操作過程中要求嚴格按照SOP進行操作
(六)凍干
各種凍干品都需建立各自的凍干工藝,凍干品外觀應該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體,具有一定的形狀,復溶*、迅速,呈澄清透明液體。
(七)分裝、燈檢和貼簽
分裝量用減重稱量法進行測量,把質量換算成體積后進行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質等。
(八)包裝
根據ELISA試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求,以流水線操作形式進行包裝。包裝時應嚴格檢查品名、批號、裝量,認真核對各物料數量,并在關盒前進行復核。
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