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    細(xì)胞培養(yǎng)操作

    點擊次數(shù):424  更新時間:2024-06-24
    細(xì)胞系(cell line)指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。 也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。(由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系(FiniteCellLine)、無限細(xì)胞系(InfiniteCellLine)),因此,細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞(特定環(huán)境下口語和書面語都使用),廣義是指可傳代的細(xì)胞。
    細(xì)胞傳代:
    a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
    b、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000rpm離心5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
    c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 
    細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000rpm條件下離心4min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
    b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱,24h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
    復(fù)蘇細(xì)胞:
    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
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