大鼠β防御素(β-Defensin)ELISA Kit試劑配制:
1、 標(biāo)準(zhǔn)品
(1) 從試劑盒中取出一支標(biāo)準(zhǔn)品,于6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml 樣本稀釋液溶解,并用吸頭對準(zhǔn)凍存管底部反復(fù)吸打5 次以助溶解,充分混勻得到標(biāo)準(zhǔn)品S7,放置備用。
(2) 取7 個1.5 ml 離心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl 樣本稀釋液。吸取250μl 標(biāo)準(zhǔn)品S7 到*個離心管中(S6),輕輕吹打混勻。從S6 中吸取250μl 到第二個EP 管中(S5),輕輕吹打混勻。以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋。S0 為樣本稀釋液。
2、 洗液工作液濃洗滌液按1:25倍用去離子水進(jìn)行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,倒入燒杯或其他潔凈容器中,再量取10ml濃洗滌液,均勻加入,攪拌混勻,在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3、 生物素標(biāo)記抗體工作液生物素標(biāo)記抗體液按1:100倍用生物素標(biāo)記抗體稀釋液進(jìn)行稀釋。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液,輕輕混勻,在臨用qian10分鐘內(nèi)配妥。
4、 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液進(jìn)行稀釋。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液,輕輕混勻,在臨用qian10分鐘內(nèi)配妥。
elisa試劑盒結(jié)果判斷與分析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
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