1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體
心鈉素抗體
丙氨酰tRNA合成酶2抗體
絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體
核突觸蛋白α抗體
自噬相關(guān)蛋白4B抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體
α-輔肌動蛋白4抗體
堿性磷酸酶抗體
AU1 tag標(biāo)簽抗體
脂肪細(xì)胞增強結(jié)合蛋白1
蛋白激酶B
蛋白激酶B
血管生成素樣蛋白2抗體
血管生成素3/血管生成素4抗體
膜粘連蛋白 I抗體
膜粘連蛋白 Ⅱ抗體
活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
水通道蛋白4抗體
活化復(fù)制因子2抗體
腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體
血管緊張素Ⅱ抗體
血管緊張素Ⅱ受體1抗體
血管生成素-1抗體
膜粘連蛋白5抗體
重組膜粘連蛋白5抗體
銜接蛋白α-Adaptin抗體
凋亡蛋白活性因子-1抗體
凋亡蛋白活性因子-1抗體
三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體
載脂蛋白E抗體
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