轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系核酸檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
蛋白激酶A2抗體
血管緊張素Ⅱ受體2抗體
ASH1蛋白抗體
芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?抗體
血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移蛋白抗體
醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體
膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體
血管生成素樣蛋白3抗體
甘油酯激酶線(xiàn)粒體抗體
磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體
自噬體ATG16L2蛋白抗體
睪丸酸性磷酸酶抗體
酸性磷酸酶抗體
極光激酶A相互作用蛋白1抗體
載脂蛋白樣蛋白6抗體
凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體
A2LD1蛋白抗體
α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體
芳香乙酰胺脫乙?;缚贵w
芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白4抗體
氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體
賴(lài)氨酸酮戊二酸還原酶抗體
錨蛋白重復(fù)域6抗體
精氨酸酶2抗體
醛固酮還原酶家族1成員C3抗體
促腎上腺皮質(zhì)激素受體
褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體
腎上腺皮質(zhì)線(xiàn)粒體鐵氧還蛋白抗體
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