磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體的生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時,或位于酶的催化位點(diǎn)時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
沙丁胺醇單克隆抗體
HRP標(biāo)記沙丁胺醇單克隆抗體
沙丁胺醇多克隆抗體
(2NP-AOZ)呋喃唑酮代謝物單克隆抗體
(2NP-AMOZ)呋喃它酮代謝物單克隆抗體
(2NP-SEM)呋喃西林酮代謝物單克隆抗體
(2NP-AHD)呋喃妥因代謝物單克隆抗體
孔雀石綠單克隆抗體
氯霉素單克隆抗體
氟喹諾酮類藥單克隆抗體
恩諾沙星單克隆抗體
環(huán)丙沙星單克隆抗體
沙拉沙星單克隆抗體
氟甲喹單克隆抗體
磺胺類藥物單克隆抗體
磺胺嘧啶單克隆抗體
磺胺二甲基嘧啶單克隆抗體
磺胺二甲氧嘧啶單克隆抗體
磺胺喹噁啉單克隆抗體
磺胺對甲氧嘧啶單克隆抗體
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