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    間接ELISA的操作程序

    點(diǎn)擊次數(shù):765  更新時(shí)間:2016-10-12

    本法主要用于檢測(cè)抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下:
    (1) 材料
    ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;
    ② DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;
    ③ ELISA檢測(cè)儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。
    (2) 方法步驟
    ① 加抗原包被 → 4℃隔夜,洗滌三次、拋干
    ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時(shí),洗滌三次、拋干
    ③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 2小時(shí),洗滌三次、拋干
    ④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘,加終止液
    ⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值,并計(jì)算出P/N比值。
    (3) 結(jié)果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,而且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下,如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,而且待檢血清的OD值≥0.4,則判為陽性,否則判為陰性。

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